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探针法定量试剂诚信企业「友名生物」

来源:友名生物 更新时间:2021-06-25 11:30:52

以下是探针法定量试剂诚信企业「友名生物」的详细介绍内容:

探针法定量试剂诚信企业「友名生物」[友名生物3da892b]

PCR法不仅仅局限于分子生物学,还因其简便、迅速等特点被广泛应用于医学、法医学、食品、环境卫生检验、动植物检验等其它领域。Taq DNA聚合酶是PCR法普遍使用的聚合酶,但其具有如下局限性。

1. 可信度 (Fidelity):通常Taq DNA Polymerase的Fidelity并不高,PCR反应有时会出现错配 (Misincorporation) 现象,因而PCR克1隆、变异导入等实验中,需加以注意。

2. 扩增的DNA长度:使用Taq DNA Polymerase进行PCR扩增时,通常可扩增几kb的DNA,超过10 kb则比较困难。这就给利用PCR进行Mapping等Genome解析带来麻烦。

3. 扩增量:使用Taq DNA Polymerase进行PCR产物克1隆及食品、环境卫生检验等时,扩增量常常达不到要求。为解决以上难题,Takara在对Polymerase、Buffer及反应条件等进行深入研究的基础上,开发了LA PCR (Long and Accurate PCR) 技术,运用此技术可大量正确地扩增长达40 kb 的DNA部分片段。LA PCR技术扩展了PCR的应用范围,可在Genome解析、基因诊断、长片段 DNA的克1隆及变异导入等方面发挥优势。

突变:PCR克1隆的一大优点是能够通过克1隆将所需突变引入目的基因中,以便进行突变研究。在 定1点突变中,经过设计的PCR引物可将碱基置换、删除或插入整合到特定序列中。引物定位到已克1隆至质粒中的序列上。随后,含有引入突变的PCR产物通过自我连接,重新生成环状质粒,并用于转化感受态细胞。

测序:PCR是为测序富集模板DNA的一种相对简单的方法。为保证DNA序列准确性,强烈建议使用高保真PCR来制备测序模板。在 Sanger测序中,PCR扩增片段经纯化并用于测序反应。使用常用的测序引物结合位点对PCR引物的 5′末端进行标记,以简化测序工作流程。

         二代测序 (NGS)中,PCR被广泛用于构建DNA测序文库。在NGS文库制备中,DNA样品通过PCR反应富集(在起始量有限的情况下)并使用adaptor(以及用于多重检测的index)标记。除了具有高保真度,DNA聚合酶还应具有zui小的扩增偏好性,从而使测序文库具有高覆盖度。

梯度PCR仪

把一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常12钟温度梯度,这样的仪器就叫梯度PCR仪。

工作模式和原理同普通PCR仪一样,它出了又普通PCR仪的功能外还多了一个梯度退火功能。DNA部分片段的扩增对温度的控制精度要求特别高,不同的DNA部分片段其退火温度不一样,通过计算DNA部分片段中的CG碱基的含量只能初步的判断出zui优退火温度在+5℃范围内,如果用普通PCR仪进行研究,需重复扩增很多次,然后做电泳进行分析来确定zui优退火温度。而梯度PCR仪则只需要一次就可以完成,在节省了时间的同时提高了实验的可靠性和准确性。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增,这样节约成本的同时也节约了时间和经费。在不设置梯度的情况下,梯度PCR仪也可以做普通PCR扩增。

该仪器主要应用于科研,教学机构,医学临床研究,高等院校,病毒分析,疾控中心等。

原位PCR仪

它是由主机,加热模块,玻片,热盖,控制软件组成。主要是应用对细胞或组织内的DNA部分片段进行原位扩增分析-即定位分析,如病源基因在细胞的位置或目的基因在细胞内的作用位置等。是保持细胞或组织的完整性,使PCR反应体系渗透到组织和细胞中,在细胞的靶DNA所在的位置上进行基因扩增,不但可以检测到靶DNA,又能标出靶序列在细胞内的位置,于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有重大的实用价值。它无需将细胞破碎提取DNA,细胞内有DNA酶的作用扩增受到一定的影响,使用不是很普遍。

该仪器主要应用于医学临床研究,如癌细胞等。

以上信息由专业从事探针法定量试剂的友名生物于2021/6/25 11:30:52发布

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